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NCTC 1469(小鼠正常肝細胞)說明書

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所  在  地上海市

更新時間:2021-04-06 22:38:16瀏覽次數:714次

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NCTC 1469(小鼠正常肝細胞)說明書在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。

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產品名稱

英文名稱

規格

NCTC 1469(小鼠正常肝細胞)說明書

NCTC 1469 (normal liver cells)

5×106cells

產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
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細胞培養技巧:
一、凍存時的注意事項:
1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %
2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。
3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽
滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。
4. 冷凍保存的細胞濃度:
4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。
4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 
凍存的步驟:
1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養基,觀察細胞生長情形。
2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。
3. 依細胞傳代培養的操作,收集培養好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數細胞濃度及凍前存活率。
4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻,
分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。
5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。
6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。
培養操作步驟
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片); 
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中; 
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠多巴胺D1受體(D1R)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠多巴胺受體D4(DRD4)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠多巴胺受體D3(DRD3)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠多巴胺轉運體(DAT)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠發動蛋白1(DNM1)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠肌營養不良蛋白(DMD)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠清道夫受體B類成員1(SCARB1)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠早期生長反應蛋白1(EGR1)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠早期生長反應蛋白2(EGR2)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠早期生長反應蛋白3(EGR3)酶聯免疫吸附測定試劑盒

小鼠早期生長反應蛋白4(EGR4)酶聯免疫吸附測定試劑盒

NCTC 1469(小鼠正常肝細胞)說明書GLP-1  胰高糖素樣肽-1抗體 規格: 0.1ml

Phospho-NMDAR2A (Tyr1325)  磷酸化谷氨酸受體2A抗體 規格: 0.1ml

SET translocation  SET易位蛋白抗體(髓系白病相關蛋白) 規格: 0.2ml

Phospho-Paxillin(Ser178)  磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規格: 0.1ml

PRDM2/RIZ1  鋅指蛋白RIZ1抗體 規格: 0.1ml

Goat Anti-human IgM/FITC  FITC標記的羊抗人IgM 規格: 0.3ml

IL-27R/TCCR  白細胞介素27受體抗體 規格: 0.2ml

NF2/Neurofibromin 2  2型神經纖維瘤抗體 規格: 0.1ml

RRAD  RRAD抗體 規格: 0.2ml

Rabbit Anti-pig IgG/Cy3  Cy3標記的兔抗豬IgG 規格: 0.1mlCD83  CD83抗體 規格: 0.2ml

ZNF307  鋅指蛋白307抗體 規格: 0.2mlMammaglobin A  珠蛋白1抗體 規格: 0.1ml

Oct-2  胚胎干細胞關鍵蛋白2抗體 規格: 0.1mlNFAM1/CNAIP  NFAM1抗體 規格: 0.2ml

DSN1  著絲粒相關蛋白DSN1抗體 規格: 0.2mlACADL  酰基輔酶A脫酶鏈抗體 0.1ml

ELAVL3/HuC  副瘤綜合癥小腦變性相關蛋白抗體 規格: 0.1mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的羊抗牛IgG 規格: 0.1ml

 

 

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