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當前位置:上海邦景實業(yè)有限公司>>細胞>>原代細胞>> 大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞規(guī)格
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產(chǎn)品型號
品 牌
廠商性質(zhì)其他
所 在 地上海市
更新時間:2021-04-07 20:59:25瀏覽次數(shù):478次
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產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞規(guī)格 | Rat intestinal artery endothelial cells | 5×105cells |
產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。?
細胞培養(yǎng)技巧:
一、凍存時的注意事項:
1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %
2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細胞或者支原體等。
3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽
滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。
4. 冷凍保存的細胞濃度:
4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml
4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。
4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。
5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。
凍存的步驟:
1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。
2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。
3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻,
分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。
5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。
6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
兔細胞色素P450家族成員1A2(CYP1A2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔低分子量細胞角蛋白(CK-LMW)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔增殖細胞核抗原(PCNA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔巨噬細胞趨化因子(MCF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CYPB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔成纖維細胞生長因子受體4(FGFR4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔半乳凝集素14(GAL14)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔雌激素受體α(ERα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔肌動蛋白束蛋白(FSCN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔肝配蛋白A3 (EFNA3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔胞外超氧化物歧化酶(SOD3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔鈣粘蛋白相關的神經(jīng)受體1(CNR-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔泛素關聯(lián)蛋白2 (UBAP2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
兔肝配蛋白A受體10 (EPHA10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞規(guī)格Mouse Anti-rat IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Bad(Ser155) 磷酸化相關死亡促進因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSPAN12/NET-2 四分子交聯(lián)體12抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
FLT-3/CD135 FMS樣酪氨酸激酶3 規(guī)格: 0.2ml
DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus) 穿膜蛋白DLK1抗體(C端) 0.1ml
WIF1 Wnt信號抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/Cy3 Cy3標記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Cyclin L/CCNL1 周期素L抗體 規(guī)格: 0.2ml
PLK4/STK18 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶18 規(guī)格: 0.2ml
C15orf41 15號染色體開放閱讀框41抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PLC gamma 1 (Tyr771) 磷酸化磷酯酶Cγ1抗體 規(guī)格: 0.1ml
EDNRB 內(nèi)皮素受體B抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-Syntaxin 1a(Ser14) 磷酸化突觸融合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
NGAL/Lipocalin 2 脂質(zhì)運載蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
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