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上海邦景實業有限公司
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閱讀:335發布時間:2015-2-4
1. ELISA微生物材料
(1)發酵3-4天(或對數生*)的菌體,離心收集菌絲體(動植物材料無需此步處理)。
(2)用經DEPC處理的水洗菌絲體2-3次,并盡量除去殘存的水。
(3)加液氮充分研磨,使其成為粉末,以釋放RNA。
(4)研磨后的樣品轉移至12 ml變性液的容器中勻漿。
2. 動植物細胞培養材料 (適用的樣品量為細胞:108)
(1)細胞或組織培養:按常規方法進行。
(2)深層懸浮培養細胞的破碎。
①細胞收集:含一定濃度的細胞培養液置于無菌離心管中,4℃,3 000 g離心5分鐘。
②細胞洗滌:上步沉淀用25毫升滅菌后冰凍的1×PBS緩沖液洗滌,然后4℃,3 000 g離心5分鐘。
③細胞破碎:在沉淀細胞中加入15 ml預冷的變性液,用無菌處理過的勻漿器勻漿。
3. 表面培養細胞的破碎
(1)確定培養瓶數量,使選定的各培養瓶細胞累加后總量達108。
(2)細胞收集:將培養液倒掉,用預冷的無菌PBS緩沖液洗滌一次,在培養瓶中加入8 ml預冷變性液,轉動培養瓶,使細胞溶解,此時可見粘度加大。
(3)用無菌吸管將*個培養瓶中的液體吸入第二個培養瓶,旋轉,溶解細胞,再吸入第三個培養瓶,以此類推,直到將所選定的培養瓶全部洗滌一次,然后從*個培養瓶開始再加入4毫升上述變性液,將所有培養瓶洗一次。
(4)將上述12 ml含細胞的變性液轉移至一50毫升無菌離心管中,勻漿破碎細胞。
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