根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，ELISA試劑盒可設計出各種不同類型的檢測方法：雙抗體夾心法、雙抗體夾心法、間接法測抗體、競爭法、捕獲法測IgM抗體、應用親和素和*的ELISA。
●酶標抗體保護液的優化
低濃度的酶標抗體極容易受到高溫、微生物、以及蛋白酶的影響而失活，嚴重影響產品的貨架期，過去通常將酶標抗體凍干保存，然而這樣的保存，ELISA試劑盒不僅由于在凍干的過程中會影響酶標抗體的活性，而且在臨床應用中頗為不便。適當的緩沖液以及添加無關蛋白質、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會對對酶標抗體的活性起一定的保護作用，因此我們設計了一組保護劑用于保護酶標抗體，與未添加任何糖蛋白的酶標抗體做對照，將經保護的酶標抗體及未保護的酶標抗體置于37℃烘箱中放置6天，考察保護液對酶標抗體的影響。
●包被緩沖液的優化
包被抗原時，為了得到*的包被效果，我們采用了碳酸鹽緩沖液(50mM ph9.6)、磷酸鹽緩沖液(50mM ph7.6)、以及TRIS鹽酸緩沖液(50 mM ph7.6)三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標抗體工作濃度為1：400及1：300，選擇*的包被緩沖液系統。同時為了保證緩沖液能夠長期保存，我們在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作為防腐劑。
●zui適抗原包被濃度的優化
用優化好的包被緩沖液，將包被抗原(ALB)稀釋成0.1ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，4.0 ug/ml，6.0 ug/ml，8.0 ug/ml，10.0 ug/ml等六個濃度，包被微孔板，每孔100ul;競爭抗原濃度為4.0 ug/ml，2.0 ug/ml;酶標抗體稀釋度為1：300，經孵育、顯色、終止后用自動酶標儀分析。顯色的強度在一定范圍內與包被的抗原量成正比，但隨著包被抗原濃度的增加，顯色的強度反而降低，我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。
●標準品及樣品稀釋液：我們采用10mM的磷酸鹽緩沖液內含0.5%的BSA作為標準品及樣品的稀釋液。
●劑量反應曲線的建立及曲線擬合方式的確定
在其他參數均已經優化完成的情況下，ELISA試劑盒將抗原標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：160mg/L,80mg/L，40mg/L，20mg/L，10mg/L，5mg/L，2.5mg/L，1.25mg/L，0.625mg/L，0.3125 mg/L，0.156 mg/L，0.780 mg/L等12個稀釋度，同時設置陰性和空白對照，加入已包被好抗原的酶標板中，同時加入酶標抗體，經孵育、顯色、終止后用自動酶標儀分析，采用文獻報道的4P對數擬合曲線。
