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ELISA試劑盒雙抗夾心法的基本原理

閱讀:509發布時間:2015-1-4

臨床上檢測抗原常用雙抗夾心型ELISA試劑盒檢測抗體常用間接型ELISA。
雙抗夾心法和間接法的詳細介紹如下:
一、雙抗夾心法
將抗體包被載體后作為固相,加入待測標本,使其中的相應抗原通過免疫學反應結合到固相抗體上,洗滌除去未結合的抗原;再加入酶結合物與已結合在固相抗體上的抗原反應,并洗滌除去未結合的游離酶結合物。zui后加入酶的相應底物,固相化的酶催化底物反應生成有色產物。在一定溫度下作用一定時間后終止反應,ELISA試劑盒顯色產物的量與結合在固相上的抗原量有關。用此法檢測的抗原,要求至少有二個結合位點,故不能用來檢測半抗原物質。整個個測定過程需要三次溫育和洗滌步驟,對每—待測抗原都要制備特異性的酶結合物。目的臨床上多用于檢測HBsAg、AFP和IgG等。
二、間接法
檢測體液中的抗體成分常用間接法。先用抗原包被固相,載體加入含待測抗體的體液標本,溫育后洗滌;再加入酶,標記的抗人IgG結合物,使之與結合在固相抗原上的人,IgG反應,溫育后洗去游離的酶結合物。用酶相應的底物反應來測定酶活性,酶活性和待測標本中與固相抗原結合的抗體量有關。
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