人肺腺癌細胞Calu-3細胞株來源

一、實驗原理
在以微生物為材料的遺傳學研究中，用某些物理因素或化學因素處理細菌，使基因發生突變，喪失合成某一物質（如氨基酸、維生素、核苷酸等）的能力，因而它們不能在基本培養基上生長，必須補充某些物質才能生長。這樣從野生型經誘變篩選得到的菌株，稱為營養缺陷型。篩選營養缺陷型菌株必須經過以下幾個步驟：誘變處理、淘汰野生型、檢出缺陷型、鑒定缺陷型。由于本實驗是以大腸桿菌為材料，所以根據細菌的特性分別說明篩選的步驟。
誘變劑的作用主要是提高突變頻率，它分為物理和化學的二類。物理誘變劑常用的有X射線、紫外線、快中子、γ射線等誘變處理首先是選擇誘變劑，微生物誘變中zui常用的物理誘變劑是紫外線。
誘變劑所處理的微生物，一般要求呈單核的單細胞或單孢子的懸浮液，分布均勻，這樣可以避免出現不純的菌落。用于誘變處理的微生物一般處于對數生長期，那時的細菌對誘變劑的反應zui靈敏。
誘變處理必須選擇合適的劑量，劑量的表示有二種，劑量和相對劑量。劑量的單位以爾格/cm2表示，一般用相對劑量。相對劑量與三個因素有關，這三個因素是：誘變源和處理微生物的距離，誘變源（紫外燈）的功率，以及處理的時間。前二個因素是固定的，所以通過處理時間控制誘變劑量。各種微生物的處理zui適劑量是不同的，須經預備實驗確定。
經處理以后的細菌，缺陷型還是相當少的，必須設法淘汰野生型細胞，提高營養缺陷型細胞所占比例，以達到濃縮缺陷型的目的。細菌中常用的濃縮法是青霉素法。青霉素是殺菌劑，它只殺死生長的細胞，對不生長的細胞沒有致死作用。所以在含有青霉素的基本培養基中野生型能長而被殺死，缺陷型不能長被保存得以濃縮。
檢出缺陷型的方法有逐個測定法、夾層培養法、*補給法、影印培養法。這里主要以逐個測定法為例進行說明。把經過濃縮的缺陷型菌液接種在*培養基上，待長出菌落后將每一菌落分別接種在基本培養基和*培養基上。凡是在基本培養基上不能生長而在*培養基上能長的菌落就是營養缺陷型。
經初步確定為營養缺陷型的菌用生長譜法鑒定。在同一培養皿上測定一個缺陷型對多種化合物的需要情況。

人肺腺癌細胞Calu-3細胞株來源二、實驗材料
大腸桿菌K12的野生型菌株大腸桿菌（Escherichiacoli）K12SF+。

人高轉移肺癌細胞095-D  
人肺鱗癌細胞SK-MES-1  
人大細胞肺癌細胞NCI-H661  
人肺黏液上皮樣癌細胞NCI-H292  
人肺退行性癌細胞Calu-6  
人肺腺癌細胞NCI-H1395  
人非小細胞肺癌細胞NCI-H358  
人非小細胞肺癌細胞HCC827  
人典型小細胞肺癌細胞NCI-H1688  
人非小細胞肺癌細胞NCI-H1299  
人胚肺二倍體細胞2BS  
人支氣管上皮樣細胞BEAS-2B  
人胚肺成纖維細胞CCC-HPF-1  
人胚胎氣管組織來源細胞CCC-HBE-2  
人肺腺癌細胞Calu-3  
人肺退行性癌細胞Calu-6  
人小細胞肺癌細胞DMS 153  
人高轉移肺癌細胞95-D  
人低分化肺腺癌細胞GLC-82  
人肺細胞HLF-a  
人胚肺二倍體細胞HEL-1  
人胚肺二倍體細胞HEL-2  
  
人肺癌細胞H1299  
人非小細胞肺癌細胞HCC827  
人胚肺二倍體細胞KMB-17  
人胚肺細胞系KuMA  
人肺鱗癌細胞LTEP-s  
人小細胞肺癌細胞LTEP-sm  
人肺鱗癌瘤株LTEP-s  
人肺腺癌細胞LTEP-a-2  
人肺腺癌細胞Lu-165  

三、實驗器具和藥品
1.用具：滅菌培養皿（9厘米），滅菌三角燒瓶（150毫升），滅菌吸管（1.5毫升），滅菌離心管。
2.培養基：
（1）肉湯液體培養基：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸餾水100毫升，pH7.2，高壓滅菌15磅/英寸215分鐘。
（2）肉湯液體培養基（ZE）：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸餾水50毫升，pH7.2，高壓滅菌15磅/英寸215分鐘。
（3）基本液體培養基：Vogel50×2毫升，葡萄糖2克，蒸餾水98毫升，pH7.0，高壓滅菌8磅/英寸230分鐘。