ATCC 小鼠骨髓細胞染色
1.實驗原理小鼠骨髓細胞有高度的分裂活性,并且數量非常多,因此不必進行體外培養,可直接觀察到分裂期細胞。處于分裂期的細胞經秋水仙素處理,阻斷紡錘絲的形成,使細胞分裂停止于中期,此時染色體達到zui大收縮,具有典型的形態。低滲處理使細胞破裂,便于染色體分散。該方法在臨床上多用于白血病的研究,也可用于觀察毒性物質對機體遺傳物質——染色體損傷的狀況。
小鼠染色體2n=40,均為端著絲粒染色體,雄性為40,XY,雌性為40,XX。
ATCC 小鼠骨髓細胞染色
2.實驗試劑與器材顯微鏡、恒溫水浴鍋、低速離心機、電子天平、解剖器械(搪瓷解剖盤、剪刀、鑷子),注射器、針頭、試管、試管架、滴管、載玻片。
0.85%生理鹽水、固定液(甲醇∶冰醋酸為3∶1)、PBS(pH6.8)、Giemsa染液、秋水仙素(以100μg/ml的濃度溶于0.85%生理鹽水中)、0.075mol/LKCl。
ATCC 小鼠骨髓細胞染色 通派細胞庫 現貨供應細胞如下:
呼吸系統
大鼠肺泡巨噬細胞NR8383
大鼠氣管上皮細胞RTE
大鼠肺成纖維樣細胞RL1
大鼠肺細胞WTRL1
循環系統
大鼠胸大動脈平滑肌細胞A7r5
大鼠心肌細胞H9c2(2-1)
消化系統
大鼠肝細胞瘤H-4-Ⅱ-E
大鼠肝細胞IAR20
大鼠肝細胞瘤H4-Ⅱ-E-C3
大鼠肝細胞BRL
大鼠肝細胞BRL 3A
大鼠肝癌細胞RH-35
泌尿系統
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞PC-12
正常大鼠腎細胞NRK
大鼠腎小球系膜細胞HBZY-1
大鼠腎細胞RK1
大鼠腎細胞NRK-52E
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)PC-12
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)PC-12
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)PC-12
腦和神經系統
大鼠垂體瘤細胞GH3
大鼠腦膠質瘤細胞C6
大鼠雪旺細胞RSC96
骨、關節、肌肉、皮膚系統
大鼠骨髓瘤細胞Y3-Ag1.2.3
大鼠纖維母細胞1/EJ 1-1
大鼠皮膚成纖維樣細胞RS1
大鼠肌肉成纖維樣細胞RM1
大鼠骨髓瘤細胞IR983F
大鼠成肌細胞L6
大鼠骨肉瘤細胞UMR-106
內分泌系統
大鼠乳腺腺癌細胞MADB106
大鼠胰島細胞瘤細胞INS-1
大鼠胰島β細胞瘤細胞RIN-m5F
大鼠胰腺外分泌細胞AR42J
大鼠乳腺癌細胞SHZ-88
生殖系統
眼、耳、鼻、喉、口腔系統
血液、淋巴系統
大鼠腹水癌細胞Walker/LLC-WRC 256
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞RBL-1
3.實驗方法與步驟
?。?)秋水仙素處理:取骨髓前3h先給小鼠腹腔注入秋水仙素,注射劑量為100μg/kg動物體重。
(2)取骨髓:用損傷脊髓法處死小鼠,然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉,取出大腿骨,用一小塊紗布搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關節頭,然后用注射器吸取5ml0.85%生理鹽水,插入股骨一端,將骨髓細胞沖洗至10ml的離心管中??芍貜蜎_洗多次,直至骨髓腔呈白色為止。
?。?)低滲處理:將所獲得的細胞懸浮液以1000rpm離心10min,吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加0.075mol/LKCL溶液(37℃)至8ml刻度,將細胞沉淀物吹散打勻,在37℃水浴低滲25min。
?。?)固定:低滲處理后,立即加入1ml新配制且預冷的固定液,抽打均勻,然后1000rpm離心10min,棄上清。沿管壁加固定液至6ml,吹散細胞后靜止固定10min,即*次固定。按上述條件離心,去上清液,再次加入固定液至6ml,進行第二次固定。10min后離心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液,沖勻制成細胞懸液。
(5)滴片:取事先在冰箱中預冷的載玻片,從約15cm高處向每個載玻片上滴1~2滴細胞懸液于粘有冰水的載玻片上,晾干。
?。?)染色:取制片平放在玻璃板上,用1∶9Giemsa染液染色20min,流水沖洗后晾干。
(7)觀察:小白鼠染色體的形態特征,并計算2n的染色體數目。