ATCC細胞特性傳代細胞來源 禽霍亂（禽巴氏桿菌病）診斷技術
1．本次實驗的目的和要求
（1）觀察家禽巴氏桿菌病的臨診表現(xiàn)和病理解剖變化
（2）掌握禽巴氏桿菌病的微生物學診斷方法
2．實驗內(nèi)容或原理
根據(jù)典型癥狀和病變，以及在顯微鏡下檢查組織涂片發(fā)現(xiàn)的兩極染色的桿菌，可初步診斷本病。但確診應依靠病原分離鑒定，病原分離鑒定原理為革蘭氏染色法。
3．需用的儀器或試劑等
豚鼠皮膚細胞GP-S1
豚鼠皮膚細胞GP-S2
豚鼠皮膚細胞GP-S3
敘利亞倉鼠肌肉細胞GH-M1
敘利亞倉鼠皮膚細胞GH-S1
家豬皮膚細胞SSC-S1
小香豬皮膚細胞SSC-S2
家貓皮膚細胞FCA-S1
綿羊皮膚細胞OAR-S1
恒河猴皮膚細胞RM-S1
家兔皮膚細胞DR-S1
大額牛皮膚細胞BFR-S3
黃牛皮膚細胞BTA-S2
瘤牛皮膚細胞BIN-S1
牦牛皮膚細胞BMU-S1
赤狐皮膚成纖維樣細胞RF-88S
豹貓肌肉成纖維樣細胞LCM4
豹貓皮膚成纖維樣細胞LCS5
ATCC細胞特性傳代細胞來源
動物：雞、小白鼠
器材：外科鑷子、外科剪、滅菌紗布、載玻片、糖發(fā)酵管等。
藥品：草酸銨結(jié)晶紫、革蘭氏碘、碳酸復紅、瑞特氏染液、美藍染液、棉拭子、接種環(huán)、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纖維二糖、綿子糖、菊糖、赤蘚糖、戊五醇、M—肌醇、水楊苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、瓊脂粉、酚紅。
4．實驗步驟
一、臨床癥狀和病理變化
⒈ 癥狀
（1）急性癥狀:描述
（2）慢性癥狀:描述
⒉ 病理變化:描述
人腦微血管內(nèi)皮細胞 HBMEC
人腦血管平滑肌細胞 HBVSMC
人腦血管外膜成纖維細胞HBVAF
人腦血管周細胞 HBVP
人脈絡絲內(nèi)皮細胞 HCPEC
人脈絡絲表皮細胞 HCPEpiC
人脈絡絲成纖維細胞 HCPF
人腦膜細胞 HMC
人神經(jīng)細胞HN
人小腦顆粒細胞 HCGC
人海馬趾神經(jīng)細胞HN-h
人少突膠質(zhì)前體細胞HOPC
人少突膠質(zhì)前體細胞HOPC-os
人膠質(zhì)細胞（少突細胞）HO
人雪旺細胞 HSC
人神經(jīng)系統(tǒng)周邊細胞 HPNC
人星形膠質(zhì)細胞 HA
人小腦星形膠質(zhì)細胞Hac
人脊髓星形膠質(zhì)細胞HA-sp
人海馬星形膠質(zhì)細胞HA-h
人星形膠質(zhì)細胞-腦干 HA-bs
人小神經(jīng)膠質(zhì)細胞HM
ATCC細胞特性傳代細胞來源
二 、微生物學診斷
⒈ 抹片的制備
用鑷子夾持病變組織肝或脾，然后以滅菌剪刀剪取小塊，夾出后將其新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層；若取血液，用滅菌剪刀剪開心臟進行蘸取或剪取凝血塊，用新鮮切面在載玻片上壓印或涂抹成薄層。自然干燥。將干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上來回通過數(shù)次，略作加熱進行固定。
⒉ 革蘭氏染色法
固定好的抹片上滴加草酸銨結(jié)晶紫色液，染色2min→水洗+加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脫色1min→水洗→加稀釋碳酸復紅復染30s→水洗→吸干→鏡檢。巴氏桿菌為革蘭氏陰性球桿菌或短桿菌，單個或成對存在，常有莢膜。
⒊ 其他染色法
甲醇固定，瑞特氏或美藍染色呈兩極濃染的菌體。
⒋ 病原分離
（1）病料的采集：zui急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶組織；對不新鮮或已被污染的樣品，可自骨髓中采取病料。采病料時用燒紅的刀片燒烙組織，而后用滅菌棉拭子或接種環(huán)通過燒烙表面插入組織或心血內(nèi)取樣。如果為活禽，可通過鼻孔擠出粘液，或?qū)⒚奘米硬迦氡橇阎腥印?/div>
（2）培養(yǎng)基制備：馬丁瓊脂培養(yǎng)基（本實驗中采用該培養(yǎng)基）、5％雞血清葡萄糖淀粉瓊脂、鮮血瓊脂培養(yǎng)基。
（3）動物接種：如果病料污染嚴重，則可將0.2mL碾碎的病料，經(jīng)皮下或腹腔內(nèi)接種家兔、小鼠或易感雞，接種動物在24h～48h內(nèi)死亡，可以從肝臟、心血中分離到巴氏桿菌。
（4）培養(yǎng)：將病料接種于馬丁瓊脂培養(yǎng)基在35℃～37℃下培養(yǎng)，經(jīng)18h～24h培養(yǎng)后菌落直徑為1mm～3mm，菌落呈散在、圓形，表面凸起呈奶滴狀。
