科研抗體 單克隆抗體在檢測中的應用
1暢單克隆抗體在熒光染色技術中的應用 不同細胞表達不同的表面標志,同一種細胞在不同時期也 可表達不同的標志。以熒光素標記單克隆抗體并采用熒光流式細胞儀(FACS)技術是檢測和分析細胞表 面標志、分離不同細胞亞群zui、zui簡捷的實驗方法。如果采用FITC、PE、PerCP 等多色熒光標記,可對 細胞進行雙色染色或多色染色。*的CD 系列單克隆抗體已達200 多種,通過計數(shù)帶有不同CD 標 志的細胞數(shù),可了解血細胞及其亞群變化,可鑒定血細胞性疾病。
熒光素標記的單克隆抗體還可用于對生物活性分子細胞內示蹤。核轉錄因子NF -κB 在非轉錄狀態(tài) 時位于胞質內,當激活時可進入細胞核,調節(jié)相關基因的轉錄。采用熒光標記的特異性抗體可對NF -κB 進行細胞內定位,從而了解細胞的狀態(tài)。抑癌基因表達的p53 蛋白與細胞周期調節(jié)及細胞凋亡有關,通常 其在細胞內的半衰期很短,常規(guī)方法難以檢測。當發(fā)生突變時,則半衰期延長,引起在細胞內聚集,采用熒 光標記的特異性抗體,可檢測細胞內p53 蛋白聚集狀況。
2暢單克隆抗體在放射免疫分析中的應用 1959 年,Yalow 等建立的放射免疫分析法(RIA),是超微量 分析*的一次突破。其原理是用放射性核素標記抗原(圖22 -5),與被測抗原競爭相應的抗體,核素標記的抗原抗體復合物越多,則被測抗原越少,反之亦然。McAb 問 世以來,因其可大批量生產(chǎn),并且具有高度特異性和均一性,使放射 免疫檢測的實驗結果準確度更高,重復性更好。在研究激素與內分 泌疾病的關系、診斷內分泌疾病及評判治療效果等方面具有重要意 義。
單克隆抗體還應用于興奮劑檢測之中,如區(qū)分人體內的內源性 促紅細胞生成素(EPO)和攝入性EPO,必須采用高特異性的單克隆 抗體予以鑒別。
3暢單克隆抗體在酶免疫分析中的應用 細胞因子在免疫調節(jié)過程中扮演重要角色,由辣根過氧化物 酶標記的抗細胞因子單克隆抗體等試劑所建立的夾心ELISA 方法,可檢測人體體液中絕大部分微量存在 的細胞因子,對評價細胞因子參與免疫調節(jié)和免疫病理過程具有重要意義。McAb 還能用于微生物的鑒 別,應用McAb 不僅能鑒別不同的病原體,還能鑒別相同病原體不同的種、型、亞型以及不同生活周期的抗 原性變化。流感病毒經(jīng)常發(fā)生變異,由此引起反復流行。單克隆抗體可分辨流感病毒微小變異,對流感快 速診斷,流行預測和疫苗的制備具有重要意義。
3暢單克隆抗體在酶免疫分析中的應用 細胞因子在免疫調節(jié)過程中扮演重要角色,由辣根過氧化物 酶標記的抗細胞因子單克隆抗體等試劑所建立的夾心ELISA 方法,可檢測人體體液中絕大部分微量存在 的細胞因子,對評價細胞因子參與免疫調節(jié)和免疫病理過程具有重要意義。McAb 還能用于微生物的鑒 別,應用McAb 不僅能鑒別不同的病原體,還能鑒別相同病原體不同的種、型、亞型以及不同生活周期的抗 原性變化。流感病毒經(jīng)常發(fā)生變異,由此引起反復流行。單克隆抗體可分辨流感病毒微小變異,對流感快 速診斷,流行預測和疫苗的制備具有重要意義。
4暢單克隆抗體在定位檢測中的應用 放射性核素99m Tc 等標記單克隆抗體,通過靜脈、腹腔或腰椎穿 刺等方式進入機體后,可特異性地與靶抗原結合,顯示抗原分子和組織細胞的機能狀態(tài)。這種檢測方法稱 為功能顯像,又稱為放射免疫顯像(radioimmunoimaging,RⅡ)。RⅡ可進行腫瘤的分類和鑒別診斷,可確 定腫瘤的原發(fā)病灶及轉移部位,并可確定腫瘤大小。RⅡ還可用于心肌壞死病灶的定位測定、血栓的定位 測定以及炎癥病灶的探測。
4暢單克隆抗體在定位檢測中的應用 放射性核素99m Tc 等標記單克隆抗體,通過靜脈、腹腔或腰椎穿 刺等方式進入機體后,可特異性地與靶抗原結合,顯示抗原分子和組織細胞的機能狀態(tài)。這種檢測方法稱 為功能顯像,又稱為放射免疫顯像(radioimmunoimaging,RⅡ)。RⅡ可進行腫瘤的分類和鑒別診斷,可確 定腫瘤的原發(fā)病灶及轉移部位,并可確定腫瘤大小。RⅡ還可用于心肌壞死病灶的定位測定、血栓的定位 測定以及炎癥病灶的探測。