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中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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ATCC細(xì)胞
SK-MEL-1細(xì)胞 SKLU1細(xì)胞 SKHEP1細(xì)胞 SKBR3細(xì)胞 SiHa細(xì)胞 SH-SY5Y細(xì)胞 SCaBER細(xì)胞 Saos-2細(xì)胞 RPMI 8226細(xì)胞 RL95-2細(xì)胞 RKO細(xì)胞 Reh細(xì)胞 RD細(xì)胞 Ramos細(xì)胞 Raji細(xì)胞 QSG-7701細(xì)胞 QGY-7703細(xì)胞 QGY-7701細(xì)胞 PLC/PRF/5細(xì)胞 PC-3細(xì)胞 PANC-1細(xì)胞 PA-1細(xì)胞 OVCAR-3細(xì)胞 OS-RC-2細(xì)胞 NTERA-2細(xì)胞 NCI-N87細(xì)胞 NCI-H838細(xì)胞 NCI-H661細(xì)胞 NCI-H596細(xì)胞 NCI-H520細(xì)胞 NCI-H460細(xì)胞 NCI-H446細(xì)胞 NCI-H358細(xì)胞 NCI-H295R細(xì)胞 NCI-H292細(xì)胞 NCI-H23細(xì)胞 NCI-H209細(xì)胞 NCI-H2087細(xì)胞 NCI-H1975細(xì)胞 NCI-H1650細(xì)胞 NCI-H1688細(xì)胞 NCI-H157細(xì)胞 NCI-H1395細(xì)胞 NCI-H1299細(xì)胞 KLE細(xì)胞 LNCaP細(xì)胞 LoVo細(xì)胞 LS180細(xì)胞 LS174T細(xì)胞 MCF 10A細(xì)胞 MCF7細(xì)胞 MEG-01細(xì)胞 MG-63細(xì)胞 MRC-5細(xì)胞 NAMALWA細(xì)胞
細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)
復(fù)蘇細(xì)胞
傳代細(xì)胞
小鼠細(xì)胞
大鼠細(xì)胞
293T細(xì)胞株
TF-1細(xì)胞
Hela細(xì)胞株
胚胎成纖維細(xì)胞

組織培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng) 傳代細(xì)胞

時(shí)間:2013/7/30閱讀:2028
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 組織培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)  傳代細(xì)胞

材料和設(shè)備
材料 從培養(yǎng)4-6周的外植體上長(zhǎng)出的愈傷組織、叢生芽或胚狀體
超凈工作臺(tái)
培養(yǎng)基 N6+0.5 mg/L 2,4-D  N6+2 mg/L 6-BA(也可以自已設(shè)計(jì))
三角瓶、帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿、鑷子、解剖刀
70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球
酒精燈、火柴、記號(hào)筆、酒精噴壺
 組織培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)  傳代細(xì)胞二、方法步驟
1 取材  在無(wú)菌室的超凈工作臺(tái)內(nèi),每次取一瓶培養(yǎng)物,灼燒培養(yǎng)瓶口約20 毫米處,用灼燒冷卻后的鑷子和解剖刀,取出外植體或者愈傷組織放在無(wú)菌的培養(yǎng)皿中。每個(gè)培養(yǎng)皿中約放4-6個(gè)外植體或者愈傷組織。把每塊愈傷組織分成兩、三個(gè)不小于5 mm見(jiàn)方的小塊。外植體下面向著中心的細(xì)胞常呈壞死狀,不適宜作繼代培養(yǎng)。這些壞死的部分應(yīng)當(dāng)與正常的部分分離并棄去。每次操作后要去掉用過(guò)的吸水紙并重新蓋上培養(yǎng)皿的蓋子。
2 繼代轉(zhuǎn)接  將正在發(fā)育的外植體或愈傷組織轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上,接種方法同前。轉(zhuǎn)接后在培養(yǎng)瓶上寫(xiě)明培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、日期。長(zhǎng)期培養(yǎng)的胡蘿卜組織會(huì)產(chǎn)生大塊愈傷組織。正在發(fā)育的愈傷組織作*次繼代培養(yǎng)所用的實(shí)驗(yàn)程序與以后每隔四周轉(zhuǎn)移一次建成愈傷組織系的繼代培養(yǎng)程序相同。
3 實(shí)驗(yàn)記錄 將實(shí)驗(yàn)記錄抄錄于筆記本上,注明實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的日期、持續(xù)期、培養(yǎng)物的數(shù)目、污染數(shù)目和所作的不同處理。在四星期內(nèi),每隔一星期用肉眼觀(guān)察培養(yǎng)物,記錄培養(yǎng)物形態(tài)的變化,培養(yǎng)物的生長(zhǎng)狀態(tài)、鮮重變化等,必要時(shí)作拍照記錄。

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