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上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司
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閱讀:496發(fā)布時(shí)間:2014-11-4
本司主營(yíng)產(chǎn)品:ELISA試劑盒,檢測(cè)試劑盒,分子生物學(xué)試劑盒,生物診斷試劑盒,金標(biāo)檢測(cè)試劑盒,放免試劑盒,生物試劑,胎牛血清,各類動(dòng)物血清,各種抗體,實(shí)驗(yàn)儀器。
標(biāo)記物 用于電鏡觀察的標(biāo)記物有三類:一類是電子密度致密的標(biāo)記物,如鐵蛋白、辣根過(guò)氧化物酶等。另一類則是放射性同位素,如135I、35S、32P、14C、3H等,第三類則是有*形狀的標(biāo)記物,如血蘭蛋白、噬菌體等。
對(duì)標(biāo)記物的要求是:具有特定的形狀、不影響抗原抗體復(fù)合物的特性與形狀。目前用于免疫電鏡的標(biāo)記物主要是鐵蛋白和HRP。兩者各有其優(yōu)點(diǎn),鐵蛋白電子密度致密。觀察時(shí)反差大,優(yōu)于酶標(biāo)記,但鐵蛋白分子量大(460 000),穿透能力差,所以適于細(xì)胞表面抗原的定位,另外鐵蛋白的標(biāo)記過(guò)程比較復(fù)雜。HRP分子量小(40 000),穿透力強(qiáng),有利于標(biāo)記抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),適于細(xì)胞內(nèi)的抗原定位。
2.固定劑 固定是免疫電鏡較關(guān)鍵的一步,免疫電鏡中的固定與一般超薄切片中的固定的不同之點(diǎn)在于既考慮保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),又要考慮到抗原的失活性問(wèn)題。
(1) 固定劑的要求:①不損害細(xì)胞內(nèi)抗原的活性;②固定速度快、效果好;③分子量小,易于滲透;④固定后,不引起交聯(lián),造成空間的阻礙,影響標(biāo)記抗體進(jìn)入抗原位。
(2) 影響固定的因素有:①采用固定劑的種類;②固定劑的濃度,濃度過(guò)大,對(duì)抗原的活性有影響,濃度過(guò)小,固定效果差;③固定劑的pH;④固定劑的溫度,一般采用2℃~4℃冷固定;這樣能降低細(xì)胞的自浴作用和水分的抽提;⑤固定時(shí)間與溫度有關(guān),溫度高,固定快,也與緩沖系的離子強(qiáng)度有關(guān),離子強(qiáng)度大,滲透壓大,穿透力強(qiáng),固定要快。不同的固定劑,或同一固定劑的不同濃度所需的固定時(shí)間也不一致;⑥與被固定的細(xì)胞類型有關(guān)。
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