魚17β-雌二醇酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
使用目的：
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關液體樣本中 17β-雌二醇(17β-Estradiol)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚 17β-雌二醇(17β-Estradiol)
。用純化的
魚 17β-雌二醇(17β-Estradiol)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次
加入 17β-雌二醇(17β-Estradiol)，再與 HRP標記的 17β-雌二醇(17β-Estradiol)抗體
形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催
化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 17β-雌二醇
(17β-Estradiol)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線
計算樣品中魚 17β-雌二醇(17β-Estradiol)濃度。
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過
（HRP）活性。
魚17β-雌二醇酶聯免疫分析試劑盒使用說明書操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
操作程序總：
計算
以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上
，根據樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有
析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值
大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
魚17β-雌二醇酶聯免疫分析試劑盒使用說明書保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
