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WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)，Western Blot技術(shù)服務(wù)，免疫印跡代測(cè)

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公司名稱(chēng)南京信帆生物技術(shù)有限公司
品牌
型號(hào)
所在地上海市
廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商
更新時(shí)間2015/9/10 16:53:37
訪問(wèn)次數(shù)2736

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Western Blot技術(shù)服務(wù)WB免疫印跡 WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)Western Blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)

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　　南京信帆生物技術(shù)有限公司是一家專(zhuān)注于為學(xué)校、科研機(jī)構(gòu)提供實(shí)驗(yàn)室的產(chǎn)品（包括各種易耗品、化學(xué)試劑、生物培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)試劑盒等）和生物化學(xué)類(lèi)檢測(cè)服務(wù)的公司。南京信帆生物技術(shù)有限公司不僅僅銷(xiāo)售國(guó)產(chǎn)各類(lèi)試劑，同時(shí)代理經(jīng)銷(xiāo)歐美國(guó)家各品牌產(chǎn)品，主要品牌有：Jackson, MP Biomedicals, Miltenyi,Illumina，Bovogen,Sigma，Abnova，Life technologies，Perkin Elmer,Nugen,Xcessbio,R&D,Tocris，CST，Abcam，Dako,DSHB，Bioxcell，Neuromab,Beckman，F(xiàn)ST,Quantifoil,Streck，Axygen，Corning,3M等。產(chǎn)品類(lèi)型主要有：一抗、二抗、抗原、重組蛋白、細(xì)胞因子、多肽、激酶、流式抗體、磁珠分選、試劑盒、抗體芯片、抑制劑、激動(dòng)劑、化合物，胎牛血清，BSA，采血管，鑷子等，所有產(chǎn)品均應(yīng)用于科研領(lǐng)域。提供的檢測(cè)服務(wù)有：

　　（1） RT-PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),QPCR(熒光定量PCR）；

　　（2） EMSA實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)；

　　（3）基因克隆突變服務(wù)；

　　（4）放免檢測(cè)服務(wù)；

　　（5） ELISA試劑盒檢測(cè)服務(wù)

　　（6） HE染色/特殊染色/技術(shù)服務(wù)、免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)；

　　（7）免疫沉淀；

　　（8） Tunel凋亡染色；

　　（9） Western-blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù)；

　　（10） RNAi/基因過(guò)表達(dá)；RNA干擾實(shí)驗(yàn)服務(wù)；南京信帆生物技術(shù)有限公司，是一家專(zhuān)注于為學(xué)校、科研機(jī)構(gòu)提供實(shí)驗(yàn)室的產(chǎn)品（包括各種易耗品、化學(xué)試劑、生物培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)試劑盒等）和生物化學(xué)類(lèi)檢測(cè)服務(wù)的公司。

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ELISA試劑盒、檢測(cè)試劑盒、免疫組化試劑盒、金標(biāo)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞凋亡試劑盒、生化試劑盒。各種動(dòng)物血清,各種抗體,細(xì)胞,耗材,生物試劑。

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上海信帆生物代做Western Blot實(shí)驗(yàn)，提供技術(shù)指導(dǎo)，提供售后服務(wù)，歡迎！WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)，Western Blot技術(shù)服務(wù)，免疫印跡代測(cè)

WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)，Western Blot技術(shù)服務(wù)，免疫印跡代測(cè) 產(chǎn)品信息

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)，不得用于醫(yī)療或食用

免疫印跡(immunoblotting)又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。
凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA 結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA 結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA 序列的相互作用。

Western blot 檢測(cè)	1000元/膜	每張膜1--8樣本，一抗另計(jì)
EMSA	2800元/膜	每張膜1--8樣本，包括探針及試劑

WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)，Western Blot技術(shù)服務(wù)，免疫印跡代測(cè)
上海信帆代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目:ELISA,免疫組化,免疫印跡Western Blot,放射免疫,實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ,特殊染色,病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)等等!我們擁有的實(shí)驗(yàn)室,客戶(hù)檢測(cè)項(xiàng)目均提供實(shí)驗(yàn)室儀器型號(hào),提供操作詳細(xì)步驟.歡迎!
Western Blot實(shí)驗(yàn)
成功完成Western Blot檢測(cè)，必須滿(mǎn)足4個(gè)條件：

凝膠洗脫：轉(zhuǎn)移期間蛋白質(zhì)必須從凝膠中洗脫出來(lái)，如果蛋白質(zhì)還截留在凝膠中，將無(wú)法在膜上進(jìn)行分析

吸附到膜上：在轉(zhuǎn)移過(guò)程中蛋白質(zhì)必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無(wú)法在膜上進(jìn)行分析

處理期間仍截留在膜上：在轉(zhuǎn)移后的處理過(guò)程中蛋白質(zhì)必須保持吸附在印跡膜上

處理過(guò)程中可接近：被吸附的蛋白質(zhì)必須能夠與檢測(cè)試劑接觸，如果蛋白質(zhì)被掩蓋則無(wú)法檢測(cè)

成功進(jìn)行WB檢測(cè)，則設(shè)置合適正確的對(duì)照是*的，只要正確設(shè)置了這些對(duì)照，即可快速和準(zhǔn)確的找到WB的問(wèn)題所在，并保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和特異性！一般需要設(shè)置的對(duì)照如下：

陽(yáng)性對(duì)照：明確表達(dá)檢測(cè)蛋白的組織或細(xì)胞，用于檢測(cè)抗體的工作效率

陰性對(duì)照：明確不表達(dá)檢測(cè)蛋白組織或細(xì)胞，用于檢測(cè)抗體的特異性

二抗對(duì)照：不加一抗，用于檢測(cè)二抗的特異性

內(nèi)參對(duì)照：檢測(cè)標(biāo)本的質(zhì)量和二抗系統(tǒng)

空白對(duì)照：不加一抗和二抗；用于檢測(cè)膜的性質(zhì)和封閉的效果

WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)，Western Blot技術(shù)服務(wù)，免疫印跡代測(cè)

WB 檢測(cè)基本過(guò)程

1 、獲取細(xì)胞或組織裂解物

1)根據(jù)檢測(cè)蛋白的位置選擇合適的裂解buffer：

蛋白位置	推薦buffer
全細(xì)胞	NP-40 or RIPA
胞漿（可溶性蛋白）	Tris-HCl
胞漿（骨架結(jié)合蛋白）	Tris-Triton
膜蛋白	NP-40 or RIPA
核蛋白	RIPA or 核蛋白提取試劑盒
線粒體蛋白	RIPA or 線粒體分離試劑盒

亦可購(gòu)買(mǎi)商業(yè)化的蛋白提取試劑盒來(lái)保證標(biāo)本制備的質(zhì)量

2)選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性！

2 、蛋白定量

常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根據(jù)情況將標(biāo)本保存在-20°C /-80°C備用，進(jìn)行免疫沉淀（IP）或者直接進(jìn)行電泳分離蛋白

3 、電泳分離蛋白質(zhì)

根據(jù)待測(cè)蛋白狀態(tài)確定電泳條件：

待測(cè)蛋白狀態(tài)	凝膠條件	上樣buffer	電泳buffer
Reduced - Denatured	還原，變性	含β-巰基乙醇或DTT，含SDS	含SDS
Reduced - Native	還原，不變性	含β-巰基乙醇或DTT，不含SDS	不含SDS
Oxidized - Denatured	不還原，變性	不含β-巰基乙醇或DTT，含SDS	含SDS
Oxidized - Native	不還原，不變性	不含β-巰基乙醇或DTT，不含SDS	不含SDS

根據(jù)待測(cè)蛋白分子量大小確定凝膠濃度

蛋白分子量（kDa）	凝膠濃度（％）
4-40	20
12-45	15
10-70	12.5
15-100	10
25-200	8

4 、轉(zhuǎn)膜

根據(jù)不同的檢測(cè)目的和待測(cè)蛋白的特性,選擇合適的膜類(lèi)型。常用的轉(zhuǎn)移膜類(lèi)型有:PVDF膜、硝酸纖維素膜（NC膜）和尼龍膜，其中PVDF和NC膜的使用頻率zui高。各種膜的技術(shù)參數(shù)及比較如下：

	PVDF膜	NC膜	尼龍膜
靈敏度和分辨率	高	高	高
背景	低	低	較高
蛋白結(jié)合能力	100-200ug/cm2（適用于SDS存在時(shí)與蛋白結(jié)合）	80-100ug/cm2	>400ug/cm2
機(jī)械強(qiáng)度	強(qiáng)	干的膜易脆	軟而結(jié)實(shí)
溶劑抗性	強(qiáng)	差	差
使用前是否需要浸潤(rùn)	100%甲醛潤(rùn)濕	緩沖液潤(rùn)濕	緩沖液潤(rùn)濕
適用染色方法	膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭	膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁	不能用陰離子染料
適用檢測(cè)方法	顯色法、化學(xué)發(fā)光、熒光、放射性、化學(xué)熒光、快速免疫檢測(cè)	顯色法、化學(xué)發(fā)光、熒光、放射性	顯色、化學(xué)發(fā)光、放射性
適用范圍	普通蛋白WB、糖蛋白檢測(cè)、蛋白質(zhì)測(cè)序、氨基酸分析、重復(fù)檢測(cè)	普通蛋白WB、氨基酸分析、重復(fù)檢測(cè)。0.1um膜適用于7kDa以下蛋白	低濃度小分子蛋白、酸性蛋白、糖蛋白、蛋白多糖、核酸檢測(cè)常用
價(jià)格	高	較低	低

5 、封閉

去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景。常用的封閉溶液有：含BSA或者脫脂奶粉的TBST或TBS

6 、一抗孵育

一抗的選擇成功與否，是整個(gè)WB實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵：選擇一抗有以下幾個(gè)注意點(diǎn)：

選擇適合檢測(cè)標(biāo)本種屬的一抗（說(shuō)明書(shū)有驗(yàn)證）

選擇適用于WB實(shí)驗(yàn)方法的一抗（說(shuō)明書(shū)有驗(yàn)證）

選擇單克隆抗體或者經(jīng)過(guò)親和純化的多克隆抗體

一抗的保存和使用：

根據(jù)說(shuō)明書(shū)的要求條件進(jìn)行抗體的保存；一般需要將抗體分裝后放入-20度保存，避免反復(fù)凍融。

抗體的工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，在4度保存不要超過(guò)2周

根據(jù)說(shuō)明書(shū)推薦濃度使用TBST稀釋一抗。由于實(shí)驗(yàn)室條件和檢測(cè)方法等的差異，說(shuō)明書(shū)推薦的稀釋比例只作參考，需要在說(shuō)明書(shū)推薦的濃度周邊進(jìn)行多個(gè)濃度梯度的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，然后選擇信噪比的抗體濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果說(shuō)明書(shū)沒(méi)有推薦濃度，可進(jìn)行多個(gè)稀釋比例進(jìn)行摸索*稀釋度（1:100-1:3000）。

孵育條件：推薦4°C孵育過(guò)夜（一般大于18個(gè)小時(shí)），根據(jù)抗體親和力不同孵育時(shí)間有所區(qū)別

內(nèi)參的選擇和使用：WB 過(guò)程監(jiān)測(cè)以及目的蛋白定量的標(biāo)準(zhǔn)！

WB常用內(nèi)參及其技術(shù)參數(shù)：

內(nèi)參名稱(chēng)	分子量大小	適用范圍
beta-actin	43kDa	胞漿和全細(xì)胞
GAPDH	30-40kDa	胞漿和全細(xì)胞
Tubulin	55kDa	胞漿和全細(xì)胞
VCDA1/Porin	31kDa	線粒體
COXIV	16kDa	線粒體
TBP	38kDa	細(xì)胞核

詳情請(qǐng)參考

7 、二抗孵育

根據(jù)說(shuō)明書(shū)推薦濃度使用TBST稀釋一抗。如果說(shuō)明書(shū)沒(méi)有推薦濃度，可進(jìn)行多個(gè)稀釋比例進(jìn)行摸索*稀釋度（1:1000-1:20000）。孵育條件一般為室溫1-2小時(shí)

8 、底物孵育

選擇顯色或者化學(xué)發(fā)光底物。一般傾向于化學(xué)發(fā)光，靈敏度高且背景低，節(jié)省抗體用量

9 、結(jié)果分析和檢測(cè)

凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)或者暗室曝光到膠片